注射用甲氨喋呤用于，一、各型急性白血病，特別是急性淋巴細胞白血病、惡性淋巴瘤、非何杰金淋巴瘤和蕈樣肉芽腫、多發性骨髓病。二、惡性葡萄胎、絨毛膜上皮癌、乳腺癌、卵巢癌、宮頸癌、睪丸癌。三、頭頸部癌、支氣管肺癌，各種軟組織肉瘤。四、高劑量用于骨肉病，鞘內注射可用于預防和治療腦膜白血病，以及惡性淋巴瘤的神經侵犯。本品對銀屑病也有一定的療效。四氫葉酸是在體內合成嘌呤核苷酸和嘧啶脫氧核苷酸的重要輔酶。本品作為一種葉酸還原酶抑制劑，主要抑制二氫葉酸還原酶，而使二氫葉酸不能還原成，有生理活性的四氫葉酸，從而使嘌呤核苷酸和嘧啶核苷酸的生物合成過程中，一碳基團的轉移過程受阻，導致DNA的生物合成受到抑制。本品主要作用于細胞周期的S期，屬于細胞周期特異性藥物。
在使用本品的過程中應當注意，一、已知對本品高度過敏的患者禁用。二、應用本品期間，禁止懷孕及哺乳。三、兒童每日1.25毫克至5毫克，視骨髓情況而定。四、老年人用藥，未進行該項實驗，且無可靠參考文獻。五、全身極度衰竭，惡液質或并發感染，及心肺肝、腎功能不全時，禁用本品。六、用藥期間應嚴格檢查血象，肝、腎功能不全患者慎用。大劑量用藥時，注意補液，堿化尿液及四氫葉酸鈣的應用。
