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皮質醇測定的方法為：分別于早8時與下午5時和午夜12時取靜脈血，測定血漿游離皮質醇的含量或留取24小時尿測定游離皮質醇的水平，血漿皮質醇腎上腺皮質束狀帶分泌的糖皮質激素，正常人血漿皮質醇的分泌受acth的調節具有一定的晝夜節律。一般于午夜或清晨一點左右分泌最少，血漿含量最低，凌晨4時分泌開始增加，早上六到八時分泌最多，八歲以后逐漸分泌減少，下午五時左右分泌量較清晨最高值比下降50%或以上，分別入血循環中的皮質醇以游離型和蛋白結合型存在稱為血漿總皮質醇。
蛋白結合型皮質醇在血漿總皮質醇的90%以上，無生物活性不能進入細胞，通過肝臟時不被分解代謝不被腎小球濾過，游離型皮質醇有生物活性可進入細胞內在肝臟代謝而失去活性并可經腎小球濾過進入尿中。尿中里有皮質醇成含量與血漿游離皮質醇的含量成正比，血漿皮質醇水平升高超過與皮質醇結合球蛋白結合的限度時血漿游離皮質醇的水平就會升高，尿中游離皮質醇的排泄量也急劇升高，影響因素正常口服避孕藥雌激素升高引起的皮質醇結合球蛋白會升高，孕期狀態下血漿皮質醇也會增高，但節律正常，盲人、夜班者，睡眠不佳者正常晝夜節律消失，苯妥英鈉、水楊酸鈉、中樞降壓藥、鎮靜劑等可使皮質醇水平降低。
